交换柱安装方法

一、离子交换柱安装方法

1、装柱

将层析柱垂直装好，关闭柱底出口，在柱内注入约1cm高的柠檬酸缓冲液。将经处理已成钠型的树脂置于烧杯中，加进1倍体积的柠棣酸缓冲液，搅成悬浮状沿柱内壁细心地把柱灌清。倒时不要太快，以免产生泡沫。待树脂在柱底逐渐沉积至约lcm高时，用极管吸去柱内上层所出现的清液，慢要打开柱底出口，继续加注树脂悬液直至柱体装到8cm高度为上。

在装柱时要避免生柱内液体流干面使装柱失败，另外树脂悬浮液的温度耍相对恒定(特别是对于采用高温法)。装好的柱体应该没有纹路，没有节痕，没有气泡，杜项衣而平整而均匀。如此，方可投入使用，否则须要重装，

2、平衡

柱装好后接上调好流速的恒流采或恒压洗脱究，四柠橡酸缓冲洗脱液以24m1/hr的流速平衡，直到流出液的PH与洗脱液的PH相司为上，这人约击要2-3倍床体积。

3、加样与洗脱

移去柱上加液器塞，打开柱底出口，小心使柱内液体流至体表面时即行关闭。用加样吸管吸取0.5ul氨基酸酸混合栏品溶液。沿柱壁小心地加入柱中，加样不要过快，以免冲坏树脂表面，加栏后慢慢打开柱底阀，使液面再与树脂面相齐时关闭，然后再用极管吸取运量洗脱液，如此清洗柱内壁四周2-3次。洗涤后，用缓冲液在柱内加全23cn高的液层，然后接上加液器调好流速(24ml/hr)即开始洗脱。

注意在调节流速时要排除掉恒汽泵或恒压瓶与杜之间连安管内的所有气泡。并且在调节时不要过猛，以免影响层析行为。

4、收集

柱流液可用自部分收集器约收20管。

5、测定

将收集的各管编号后，分别取0.5ml收集液于一洁净的干试管中，加入Iml洗脱缓冲液;0.5mlKCN茚三酮试判，混合后在100C水浴加热25分钟，然后水冷却5-10分钟，加3ml 60%乙醇稀释，摇匀后用72型或721型分光光度计在570nm处比色。测定后以光吸收为纵坐标，收集的管数或ml数为横坐标绘制洗脱由线。

6、再生

对于装好的柱使用几次后需要0. 2N NaOH溶液洗脱，再用燕留水洗至中性后重复使用。对于不知或难以告计层析行为的样品层析时，要采用逐管收集测定跟踪法，以便掌握层析的结果。氨基酸测定一般在1PH左右，在本实验中因缓冲液的PH就为5.3，因此可直接测定。但如果PHI偏差要求太大，则可以加lml、2N, PHS.5醋酸缓冲液，以保注测定条件。